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并取1mL进行核酸提取及PCR检测;每种样品每个浓度进行10次实验

来源:未知作者:admin 更新时间:2018-05-16 07:23
本文对一种金黄色葡萄球菌、沙门氏菌快速检测方式进行了多方面的评价,该方式识别性和特同性都为100%,在发酵乳中检测活络度可达1000CFU/mL,而且在检测发酵乳中的金黄色葡萄球菌和沙门氏菌时与常规培育方式精确度分歧。 在发财国度以及成长中国度,食源性致

  本文对一种金黄色葡萄球菌、沙门氏菌快速检测方式进行了多方面的评价,该方式识别性和特同性都为100%,在发酵乳中检测活络度可达1000CFU/mL,而且在检测发酵乳中的金黄色葡萄球菌和沙门氏菌时与常规培育方式精确度分歧。

  在发财国度以及成长中国度,食源性致病菌激发的疾病曾经成为严峻要挟公家健康的主要要素[1,2]。金黄色葡萄球菌(StaphylococcusAureus)是激发多品种型传染和食物中毒的病原菌,由此激发的食物中毒发生频次很高[3]。沙门氏菌是最常见的食源性致病菌,也是食源性致病菌中研究最活跃的细菌[4]。沙门氏菌大大都由食物传布,少数可通过水介质传布,可惹起多种肠道性疾病及食物中毒[5],是世界上分布最普遍的致病菌之一。

  保守的检测方式检测食物中的致病菌具有周期长、步调繁琐等错误谬误,若何快速精确地检测食物中的致病菌曾经成为当前的研究热点[6],快速而精确的检测食源性致病菌的方式变得越来越主要[7,8]。

  及时荧光定量PCR融汇了PCR手艺的核酸高效扩增、探针手艺的高特同性以及荧光手艺的高敏感性[9],在食源性致病菌的检测上曾经获得了普遍的使用。

  本研究对利用及时定量PCR道理的金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒进行了多方面的评价,为食物平安检测中金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的检测供给了一种快速精确的检测手段。

  金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)LR70501、沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)LR70601。

  7.5%NaCl肉汤、BPW、BP平板、血平板、血浆凝固酶试剂、SC、TTB、XLD平板、BS平板、TSI、赖氨酸、NA、靛基质、尿素、氰化钾等培育基。

  及时荧光PCR仪:雅睿MA-6000P、伯乐CFX96。恒温培育箱、离心计心情(2mL)、掌式离心计心情(0.2mL8联管)、金属浴、涡旋夹杂器、移液器(10、100、1000μL)及吸头、离心管(2mL)、PCR反映管(0.2mL)等。

  用金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)对金黄色葡萄球菌/沙门氏菌阳性菌株(尺度株及分手株)及其干扰菌株进行检测并记实检测成果。

  取金黄色葡萄球菌/沙门氏菌尺度菌株增菌液,别离稀释到101、102、103、104CFU/mL,并进行核酸提取及PCR检测,每株尺度株每个浓度进行10次尝试,10次检测都是阳性的最低浓度即为金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR探针法)对该菌株的检测活络度[10]。

  取样品(奶粉、巴氏奶、纯牛奶以及发酵乳)25g(mL),插手225mL、7.5%NaCl肉汤/BPW;取金黄色葡萄球菌ATCC27217/沙门氏菌CICC21498尺度菌株增菌液添加到稀释好的样品中,使终浓度别离为101、102、103、104CFU/mL,并取1mL进行核酸提取及PCR检测;每种样品每个浓度进行10次尝试,10次检测都是阳性的最低浓度即为金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)对样品(奶粉、巴氏奶、纯牛奶以及发酵乳)中金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的检测活络度。

  取样品(阳性发酵乳)25g,插手225mL,7.5%NaCl肉汤/BPW,添加金黄色葡萄球菌ATCC27217/沙门氏菌CICC21498约2CFU,重庆时时彩计划表反复30次,37℃增菌18h,对增菌后的样本进行金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的计数并按照国标进行进一步的验证,记实阳性样本的金黄色葡萄球菌/沙门氏菌浓度(CFU/mL)。时时彩龙虎和赔付规则

  取30份样品(发酵乳),每份取25g,插手225mL,7.5%NaCl肉汤/BPW;然后再取25g,插手225mL 7.5%NaCl肉汤/BPW,添加金黄色葡萄球菌ATCC27217/沙门氏菌CICC21498约100CFU。37℃增菌18h,从中取1mL进行核酸提取并利用金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒进行检测,其余增菌液按照国标方式继续检测并记实最终检测成果。

  金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒对金黄色葡萄球菌/沙门氏菌阳性菌株及干扰菌的检测成果如表1a/表1b,金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)对金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的识别性和特同性均为100%。

  金黄色萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒对分歧的金黄色葡萄球菌/沙门氏菌尺度菌株检测活络度如表2a/表2b所示,金黄色萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒对金黄色葡萄球菌/沙门氏菌尺度菌株的检测活络度为100CFU/mL。

  金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒对样品中金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的检测活络度如表3a/表3b所示,金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒对奶粉、巴氏奶、纯牛奶中金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的检测活络度为100CFU/mL,对发酵乳中金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的检测活络度为1000CFU/mL。

  发酵乳利用7.5%NaCl肉汤/BPW增菌18h后,检测金黄色葡萄球菌/沙门氏菌浓度为105~107CFU/mL(<10CFU/mL可能是尺度菌株没有添加到样品中或者添加到样品中的尺度菌株形态不抱负而未能成功增菌),如表4a/表4b。

  样品及其阳性添加用国标方式与PCR试剂盒方式检测成果如表5a/表5b,两种方式合适度100%。

  金黄色葡萄球菌/沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)LR70501/LR70601对金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的特同性和活络度均为100%,对纯菌的检测活络度为100CFU/mL,对奶粉、巴氏奶、时时彩定毒胆一期必中纯牛奶中金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的检测活络度为100CFU/mL,对发酵乳中金黄色葡萄球菌/沙门氏菌的检测活络度为1000CFU/mL,在检测发酵乳中的金黄色葡萄球菌/沙门氏菌时,该试剂盒检测与国标法检测合适度没有显著差别。

  荧光定量PCR方式活络度和精确性高于典范的培育法而且缩短了检测周期,但也必需考虑到食物样品基质的复杂性以及其可能具有的PCR抑止因子,寻找无效的样品前处置方式取出样品中的PCR抑止因子和改善PCR系统以提高整个反映系统的抗干扰能力,是将来提高PCR方式适用性的两个标的目的。

  [3]徐晓可,吴清平等PCR手艺检测食源性致病菌的研究进展[J].微生物学传递.2007,34(5).

  [4]邵碧英,陈彬等.沙门氏菌多重PCR检测方式的成立[J].阐发检测.2007,28(10).

  [5]郭润霞,鲁波等.沙门氏菌检测手艺现况[J].中国卫生查验杂志.2007,17(10).

  [6]杨浩民,王旭,等.致病菌快速判定研究进展[J].中国公共卫生.2007,23(9).

  [9]郭杨,陈世界,等.荧光定量PCR手艺及其使用研究进展[J].动物医学进展.2009,30(2).

  [10]钟岸,蔡蓁,王毅.及时荧光PCR和通俗PCR方式检测病原微生物的活络度比力[J].2013,24(13).

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